Vampire haben einziehbare Fangzähne. Sie müssen sich nicht unbedingt von Menschenblut ernähren, sie können auch Rinderblut trinken. Rinderblut ist für Vampire ekelig, aber sie gehen damit ein Kompromiss ein, denn wenn sie keine Menschen töten, werden sie nicht gejagt, zu mindestens nicht von den ehrlichen Jägern. Diesen Kompromiss geht aber nicht jeder Vampir ein, obwohl ihre 'Art' schon fast ausgerottet ist. Vampire sind eine Rasse übernatürlicher und blutsaugender Kreaturen, die alle einmal Menschen waren. Es gab viele Begegnungen zwischen Vampiren und den Winchesters sowie Gordon Walker und anderen Jägern. Es wurde allerdings gesagt, dass eine Begegnung mit einem Vampir eher selten ist, da Jäger diese bis zur Ausrottung gejagt hätten, obwohl sie die Fähigkeit besitzen, sich durch simple Transfusion zu reproduzieren und es hierfür lediglich einen Vampir benötigen würde.Alle Vampire haben ihren Ursprung beim Alphavampir, welcher den ersten seiner Art darstellt und der wiederrum von Eve erschaffen wurde. Der Alpha scheint dabei eine Art von psychischer Verbindung mit den anderen Vampiren zu besitzen. Über die Jahre bis zum Jahr 2006 wurden Vampire derart intensiv gejagt und wurden infolge dessen so rar, dass John Winchester sie für ausgestorben hielt. Doch begannen sie mit einer Art Wiederaufbau, vor allem nachdem der Alphavampir ihnen anordnete die existierenden Nester zu vergrößern, was wiederrum ein Befehl seitens Eve war. Vampire sind unsterblich, dabei sind viele von ihnen hunderte von Jahren alt, manche sogar noch älter. Ihre Ernährung basiert strikt auf Blut und obwohl sie das der Menschen stets bevorzugen, trinken sie auch Blut von Tieren. Die Vampire müssen dabei ihre Opfer am Leben erhalten, da das Blut für sie ansonsten toxisch wird. Manche Vampire leben dabei von gespendetem Blut, sie trinken also lediglich aus Blutbeuteln, da sie niemandem schaden möchten.


Der Vampirismus verbreitet sich durch die Aufnahme von Vampirblut oder durch den direkten Kontakt mit dem menschlichen Blutfluss. Dies sind momentan die einzigen Wege einer Infektion. Vielen Jägern spritzt das Vampirblut bei einer Jagd ins Gesicht, doch werden sie dabei nicht verwandelt, was zeigt, dass das Vampirblut nicht über die Augen, die Nase oder unverletzte Haut in den Blutkreislauf gelangen kann. Dies bedeutet auch, dass eine gewisse Menge an Blut für eine Verwandlung über den Mund konsumiert werden muss, da besagtes Blut in kleinen Mengen in den Mund gelangt und dort zusammen mit dem Speichel heruntergeschluckt wird. Dies ist für Jäger von großem Vorteil, da das Töten eines Vampirs für gewöhnlich eine blutige und schmutzige Angelegenheit ist. Frisch verwandelte Vampire sind zunächst immer verwirrt und desorientiert, besonders aufgrund der Anpassung an die neu gewonnen, verschärften Sinne und die Empfindlichkeit gegenüber Licht. Danach tritt normalerweise ein Blutrausch ein, der den neuen Vampir auf gewisse Weise Amok laufen lässt. Sie suchen dann für gewöhnlich denjenigen auf, der sie verwandelt hat, also ihren Erschaffer und akzeptieren diesen im Normalfall als ihren Anführer. Viele der gezeigten Vampire in der Serie entwickeln die Mentalität oder werden in die des Nests eingeführt. Diese frisch-verwandelten Vampire sind immer noch halb Mensch, bis sie ihr erstes Blut trinken.

Heilung

Vampirismus ist nur sehr selten heilbar. Das einzig bekannte Heilmittel ist eine Art Suppe bzw. Trank, welcher im Notizbuch von Samuel Campbells Großvater dokumentiert ist. Dieser benötigt das Blut des Vampirs, der einen verwandelt hat sowie Knoblauch und Salbei. Die drei Zutaten müssen vermischt werden und derjenige der geheilt werden soll, muss diesen daraufhin trinken. Es funktioniert allerdings nicht, wenn die Person bereits den kleinsten Tropfen Blut getrunken hat. Die Umkehrung des Vampirismus ist dabei sehr schmerzhaft und wird als Horrortrip beschrieben, doch entstehen dabei keine signifikanten Nebenwirkungen. Dennoch bewirkt das Heilmittel im Nachhinein ein leichtes Kranksein, das ein paar Tage andauert. Es ist zudem nicht erforderlich den Vampir, der einen verwandelt hat und von welchem man das Blut benötigt, am Leben zu erhalten, damit das Ritual funktioniert.
Diese Methode wurde seither zur Heilung bei Dean Winchester angewandt, sowie bei einem Mädchen, welches dazu benutzt wurde, junge Jäger auszutricksen und letztlich auch bei Annie Jones.

Wiederbelebung

Mit Hilfe eines Rituals ist es möglich, einen toten Vampir wiederzubeleben. Dafür muss man jedoch zunächst die Seele des Vampirs im Fegefeuer aufsuchen und diese mit Hilfe eines anderen Rituals auf die Erde bringen. Dort sucht man die Überreste des Vampirs auf und vereinigt diese wieder mit der Seele. Der Vampir ist daraufhin ohne zurückgebliebenen Schaden wiederbelebt.